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森貝伽生物：雞紅細(xì)胞制備與常見問題Q&A


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雞的采血

01、心臟采血  

雞右側(cè)臥自然保定，從膝關(guān)節(jié)稍前下方處垂直地面進(jìn)針采血。

要點：

（1）采血前雞盡可能處于自然狀態(tài)。

（2）垂直地面進(jìn)針：刺入正確時，松開注射器，會看到注射器隨心臟的自然跳動。

（3）先把針全部刺入，如采不出，可以一邊向上提注射器，一邊采血，注意向上提注射器時速度要慢。


02、翅靜脈采血   

（1）捏住近心端，讓翅靜脈臌起。

（2）針頭斜面向上，小角度刺入翅靜脈中，待出現(xiàn)回血時，松開近心端，固定好針頭進(jìn)行采血即可。



雞紅細(xì)胞如何制備？


以1%雞紅細(xì)胞為例

把采集過動物血液的采血管依次放入卡套內(nèi)，并將放置于離心機對角線的兩個卡套配平，使其重量相同(相差不超過0.2g)，低溫離心機4000r/min，離心10分鐘。離心機的使用參照離心機的操作規(guī)程。


1、清洗紅細(xì)胞

1.1   于超凈臺內(nèi)采集上清液置于無菌血清瓶中即為血漿（不同的抗凝劑需做好標(biāo)記），-20℃冷凍保存于固定區(qū)域


1.2   小心吸取紅細(xì)胞上方的白細(xì)胞層，并棄去。


1.3   在每根吸除過白細(xì)胞的采血管中，加入和壓積紅細(xì)胞等體積的無菌1×PBS，并輕輕吹打混勻。


1.4   將混勻好的紅細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)至15ml無菌離心管中，低溫離心機2000r/min離心10分鐘。


1.5   吸取上清液并棄去。


1.6   加入和壓積紅細(xì)胞等體積的無菌1×PBS，并輕輕吹打混勻。低溫離心機2000r/min離心10分鐘。重復(fù)1.5-1.6步驟一次，吸取上清液并棄去即為紅細(xì)胞原液。


2、制作紅細(xì)胞懸液
根據(jù)所需的紅細(xì)胞百分比濃度，在血清瓶中加適量2-8℃保存的阿氏液和紅細(xì)胞原液，制成1%的雞紅細(xì)胞懸液。

保存方法


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   （1%雞紅細(xì)胞保存條件：2-8℃，30天）



  注意事項：

  • 注意不要凍融

  • 每天需上下輕輕顛倒混勻

  • 注意無菌操作

  • 2-8℃保存，盡快使用

  • 盡量避免劇烈震蕩


常見問題


1、 什么是溶血？
溶血，即血液中紅細(xì)胞因為內(nèi)外界各種原因破裂，血紅蛋白溢出，導(dǎo)致血清、血漿由淡黃色變?yōu)檠t色。實驗過程中如果發(fā)生溶血現(xiàn)象，盡可能重新采血，因為溶血樣本可能會對血液中的一些生化指標(biāo)和激素含量產(chǎn)生影響。但若無法重新采血，只能根據(jù)自身需要測量的指標(biāo)，將溶血與非溶血樣本進(jìn)行對照試驗，判斷是否有影響，如果無影響，即可使用溶血樣本進(jìn)行試驗。


2、 如何判定溶血？
一般采用觀察靜置或離心后的標(biāo)本來判斷是否溶血。

【全溶血】溶液澄明，紅色，管底無紅細(xì)胞殘留

【部分溶血】溶液澄明,紅色或棕色，底部有少量紅細(xì)胞殘留;鏡檢紅細(xì)胞稀少或變形?

【不溶血】紅細(xì)胞全部下沉，上清液體無色澄明;鏡檢紅細(xì)胞不凝聚

【紅細(xì)胞凝聚】溶液中有棕紅色或紅棕色絮狀沉淀，振搖后不分散


3、哪些問題會導(dǎo)致溶血？

1、由于抽血困難，采血時定位進(jìn)針不準(zhǔn)、針尖在血管中探來探去造成血腫等而發(fā)生溶血。

2、注射器和針頭連接不緊，采血時空氣進(jìn)入，或動物緊張導(dǎo)致血流不暢，抽血時間過長，都會導(dǎo)致血標(biāo)本中混有泡沫，這種混有泡沫的血標(biāo)本，放置一定時間后泡沫破裂或迅速干燥，造成血細(xì)胞破壞而發(fā)生溶血。

3、血標(biāo)本在運輸過程中（或離心前）過度振蕩或儲存不當(dāng)。

4、不合格的塑料制品會因聚合不完全而具有毒性，這種毒性可造成溶血。

5、試管質(zhì)量粗糙。

6、抽血消毒時，酒精未干就進(jìn)行抽血。

7、操作過程中，可能引入的動物的毛發(fā)，而導(dǎo)致溶血。

8、盡量不要收集注射器推到最后的血，也不要使勁擠壓注射器。



4、雞紅細(xì)胞有核嗎？
 有細(xì)胞核。人和哺乳類的紅細(xì)胞是無核的，而鳥類、兩棲類、魚類的紅細(xì)胞是有核的。人的紅細(xì)胞本來也有核的，是在后來發(fā)育過程中才失去核的。


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（雞紅細(xì)胞鏡下圖）