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A549細(xì)胞來源

A549細(xì)胞又稱為肺癌人類肺泡基底上皮細(xì)胞，最早是在1972年由D.J.Giard等人通過一位58歲的白人男性的外植體腫瘤，轉(zhuǎn)移并培養(yǎng)肺腫瘤組織而得到的。

       在自然界中，這些細(xì)胞是鱗狀的，它們可以通過肺泡擴(kuò)散傳播一些物質(zhì)，如水和電解質(zhì)。如果將A549細(xì)胞體外培養(yǎng)，它們會(huì)成長為單層細(xì)胞，附著或緊貼在培養(yǎng)瓶上。人肺泡上皮細(xì)胞株A549可以固定或懸掛在體外的溶液。

A549細(xì)胞培養(yǎng)體系

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A549細(xì)胞特點(diǎn)

     部分細(xì)胞傳代后細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)黑色小點(diǎn)，細(xì)胞間隙內(nèi)出現(xiàn)少量顆粒物或者培養(yǎng)基中浮游著少量死細(xì)胞等均為正?，F(xiàn)象，對細(xì)胞的增殖及試驗(yàn)無影響。

細(xì)胞消化或者復(fù)蘇操作不當(dāng)容易導(dǎo)致細(xì)胞死亡裂解產(chǎn)生大量碎片及顆粒，進(jìn)而影響活細(xì)胞狀態(tài)，注意消化或復(fù)蘇過程盡量輕柔，嚴(yán)格控制消化時(shí)間和復(fù)蘇操作規(guī)范，傳代或復(fù)蘇24h后建議觀察細(xì)胞，建議換液一次去除死亡細(xì)胞；

A549細(xì)胞常見問題處理

Q: 培養(yǎng)過程中出前黑點(diǎn)問題如何處理？

A: 細(xì)胞內(nèi)的黑色顆粒是細(xì)胞外分泌泡及細(xì)胞器折光，這個(gè)屬于細(xì)胞自身特性，無法清除也無法改變，大部分細(xì)胞都會(huì)有這種現(xiàn)象，只是不同細(xì)胞顆粒多少有區(qū)別，細(xì)胞培養(yǎng)體系不適應(yīng)、營養(yǎng)缺乏、滲透壓異常等均可能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)顆粒增加，建議使用合適的培養(yǎng)條件。

細(xì)胞外的黑色顆粒大部分是細(xì)胞碎片和細(xì)胞代謝產(chǎn)物，可以先吸走培養(yǎng)基后用PBS潤洗清除，再加新的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。潤洗不能清除的可以換液清洗后等細(xì)胞密度70-80%左右消化處理細(xì)胞，消化完成后加完全培養(yǎng)基終止消化，混勻細(xì)胞，收集細(xì)胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。再加5ml PBS重懸細(xì)胞，再離心后，用完全培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時(shí)碎片比較少，傳代時(shí)可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。

Q: A549細(xì)胞最佳消化時(shí)間建議多久

A： 每個(gè)客戶用的胰酶活力及消化步驟、試劑都是不一樣的，不能完全規(guī)定消化時(shí)間，以實(shí)際消化效果和客戶經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。

Q:  A549 細(xì)胞倍增時(shí)間多久？

A: 該細(xì)胞倍增時(shí)間較短，生長速度快，注意控制傳代密度，建議1:3-1:4。